Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Plasmide Double Nickase (h): sc-402004-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Double Nickase Plasmid (h) e il Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADCY8. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Antibody (B-6): sc-377323
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402004-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402004-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ADCY8 umano codifica l’adenilato ciclasi 8 (AC8), un enzima di membrana stimolato da Ca2+/calmodulina che converte l’ATP in cAMP e collega i segnali del calcio alla produzione di secondi messaggeri. Il cAMP generato da AC8 attiva PKA, EPAC e le vie mediate da canali regolati da nucleotidi ciclici, modulando la trascrizione dipendente da CREB, la plasticità sinaptica e l’accoppiamento stimolo-secrezione nei tessuti eccitabili. Integrando gli input dei GPCR con la dinamica intracellulare del Ca2+, ADCY8 contribuisce alla regolazione della segnalazione neuronale, delle risposte endocrine e dell’omeostasi cellulare adattativa. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di ADCY8 sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici e cognitivi e vengono studiate nel contesto della disregolazione della segnalazione del cAMP osservata nella ricerca sulle malattie neurologiche e metaboliche.
Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADCY8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADCY8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADCY8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADCY8 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.