Plásmido CRISPR de Activación (h) Adenosine A2A-R: sc-400807-ACT

ADORA2A codifica el receptor de adenosina A2A (A2A-R), un receptor acoplado a proteína G que señaliza principalmente a través de Gs para aumentar el cAMP y activar programas transcripcionales dependientes de PKA/CREB. El A2A-R integra señales extracelulares de adenosina generadas durante el estrés metabólico o la inflamación, modulando respuestas como la producción de citocinas, la activación de leucocitos y la señalización neuromoduladora. En el sistema nervioso central, ADORA2A está enriquecido en circuitos estriatales donde interactúa funcionalmente con la señalización dopaminérgica para regular la plasticidad sináptica y el control motor. La desregulación de la señalización de ADORA2A se ha implicado en la neuroinflamación y en procesos neurodegenerativos, así como en la supresión inmunitaria asociada a tumores, lo que respalda su utilidad para el análisis de vías en modelos de inmunología y neurociencia.

Adenosine A2A-R El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADORA2A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Adenosine A2A-R El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADORA2A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADORA2A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Adenosine A2A-R. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADORA2A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Adenosine A2A-R en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Adenosine A2A-R en células tumorales con expresión de ADORA2A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.