Plásmido CRISPR de Activación (m) ADAMTS-9: sc-430369-ACT

Adamts9 codifica ADAMTS-9, una metaloproteasa secretada de la familia ADAMTS que remodela la matriz extracelular mediante el procesamiento de proteoglucanos y sustratos relacionados. En tejidos de ratón, ADAMTS-9 contribuye al recambio de la matriz pericelular, la migración celular y programas morfogenéticos que dan forma al desarrollo de órganos y a la homeostasis tisular. Su actividad se entrecruza con vías que regulan la organización de la matriz, la biología del cartílago y del esqueleto, y la señalización del estroma que influye en microambientes inflamatorios y fibróticos. La alteración de la expresión o la función de Adamts9 se ha asociado con anomalías del desarrollo y fenotipos de enfermedad impulsados por la matriz, lo que lo convierte en una diana útil para estudiar redes de proteasas extracelulares.

ADAMTS-9 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Adamts9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ADAMTS-9 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Adamts9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Adamts9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ADAMTS-9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Adamts9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ADAMTS-9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ADAMTS-9 en células tumorales con expresión de Adamts9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.