ADAMTS-7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403381-ACT

ADAMTS7 codifica a ADAMTS-7, uma metaloproteinase secretada dependente de zinco da família ADAMTS que remodela a matriz extracelular ao processar substratos de proteoglicanos e regular a renovação da matriz. Por meio de seus domínios catalítico e acessórios, a ADAMTS-7 influencia as interações célula–matriz, o remodelamento tecidual e programas de sinalização inflamatória que moldam a homeostase vascular e do tecido conjuntivo. Alterações na expressão ou na atividade de ADAMTS7 têm sido associadas a vias relevantes para a migração de células musculares lisas vasculares e o remodelamento da matriz extracelular, implicando-a em mecanismos ligados à aterosclerose e à suscetibilidade à doença arterial coronariana. Assim, a ADAMTS-7 é amplamente estudada em modelos de lesão vascular, remodelamento do tipo fibrótico e alterações de sinalização impulsionadas pela matriz.

ADAMTS-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADAMTS7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ADAMTS-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADAMTS7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADAMTS7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ADAMTS-7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADAMTS7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ADAMTS-7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ADAMTS-7 em células tumorais com expressão de ADAMTS7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.