ADAMTS-15 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405885

Panoramica

ADAMTS15 codifica ADAMTS-15, una metalloproteinasi secreta zinco-dipendente della famiglia ADAMTS che contribuisce all’organizzazione della matrice extracellulare (ECM) attraverso l’elaborazione proteolitica dei componenti della matrice e la regolazione del rimodellamento tissutale. Modellando microambienti pericellulari ricchi di proteoglicani e collagene, ADAMTS-15 influenza l’adesione e la migrazione cellulare, nonché le vie di meccano-trasduzione legate alle interazioni stroma–epitelio. Un’attività alterata di ADAMTS15 è stata studiata in contesti di omeostasi della cartilagine e del tessuto connettivo, rimodellamento associato alla fibrosi e dinamiche della ECM legate ai tumori, dove variazioni nell’equilibrio tra proteasi e inibitori possono influenzare l’invasione e il potenziale metastatico. Queste caratteristiche rendono ADAMTS-15 un nodo utile per studiare il turnover della matrice, la segnalazione del microambiente e le reti di proteasi in sistemi cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAMTS-15 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ADAMTS15 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ADAMTS15 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ADAMTS15 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ADAMTS-15.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ADAMTS15 per lo studio della segnalazione di ADAMTS-15, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ADAMTS15 critici per la funzione di ADAMTS-15
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ADAMTS15 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ADAMTS-15 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ADAMTS-15 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ADAMTS15. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ADAMTS-15 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ADAMTS-15 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ADAMTS15 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ADAMTS15 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.