ADAM8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418993

Panoramica

Adam8 codifica una metalloproteasi-disintegrina transmembrana (ADAM8) che media lo shedding dell’ectodominio e le interazioni cellula–cellula o cellula–matrice, integrando la proteolisi con la segnalazione di adesione. Nei compartimenti immunitari e stromali del topo, ADAM8 contribuisce alla segnalazione infiammatoria, al reclutamento dei leucociti e al rimodellamento tissutale attraverso la regolazione dei recettori di superficie e della disponibilità di citochine/chemochine. La sua attività interseca vie collegate agli output di segnalazione MAPK e NF-κB modulando l’attivazione recettoriale e i segnali del microambiente extracellulare. Un’espressione disregolata di Adam8 è stata associata a infiammazione cronica, fibrosi e processi associati ai tumori quali l’invasione e il rimodellamento della nicchia metastatica, rendendolo rilevante per studi meccanicistici in modelli di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM8 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adam8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adam8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adam8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ADAM8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adam8 per lo studio della segnalazione di ADAM8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adam8 critici per la funzione di ADAM8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adam8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ADAM8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ADAM8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adam8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ADAM8 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ADAM8 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adam8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adam8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.