ADAM12 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418983

Panoramica

ADAM12 (a disintegrin and metalloproteinase 12) è una proteasi ancorata alla membrana e un regolatore dell’adesione che modula il rimodellamento della matrice extracellulare, la segnalazione dei fattori di crescita e le interazioni cellula–cellula. Nei tessuti murini, ADAM12 contribuisce allo shedding proteolitico delle proteine di superficie cellulare e influenza vie associate alla miogenesi, alla fibrosi e al rimodellamento stromale, inclusi processi legati a EGFR e TGF-β. La sua attività influisce sulla migrazione cellulare, sulla differenziazione e sulla meccanotrasduzione, alterando la composizione della ECM e la disponibilità dei recettori. Un’espressione o un’attività di ADAM12 deregolata è stata associata a rimodellamento tissutale patologico e a fenotipi correlati all’infiammazione, rendendola rilevante per lo studio dei meccanismi di malattia in contesti muscoloscheletrici e fibrotici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM12 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adam12 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adam12 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adam12 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ADAM12.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adam12 per lo studio della segnalazione di ADAM12, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adam12 critici per la funzione di ADAM12
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adam12 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ADAM12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ADAM12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adam12. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ADAM12 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ADAM12 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adam12 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adam12 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.