Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTR-I (m2): sc-418974-KO-2

Présentation

Acvr1 code le récepteur de l’activine A de type I (ACTR-I/ALK2), un récepteur kinase de type I à sérine/thréonine appartenant à la superfamille du TGF-β, qui transmet les signaux des ligands BMP. Après liaison du ligand et activation par les récepteurs de type II, ACTR-I phosphoryle SMAD1/5/9 afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant la mise en place des patrons embryonnaires, la différenciation ostéogénique et l’homéostasie tissulaire. La signalisation dépendante d’ACVR1 s’intègre aux voies MAPK et à d’autres voies spécifiques du contexte pour coordonner les décisions de destinée cellulaire et les réponses aux morphogènes. Une activité d’ACVR1 dérégulée ou un déséquilibre de la voie BMP est associé à une squelettogenèse anormale et à des phénotypes d’ossification ectopique, faisant d’Acvr1 un nœud central pour les études mécanistiques en biologie du développement et dans les modèles de maladies musculosquelettiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTR-I (m2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Acvr1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Acvr1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Acvr1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACTR-I.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Acvr1 pour l'étude de la signalisation de ACTR-I, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Acvr1 essentiels à la fonction de ACTR-I
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Acvr1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACTR-I plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ACTR-I plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Acvr1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACTR-I plasmide HDR (m) et le ACTR-I (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Acvr1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Acvr1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.