ACTG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400006

Übersicht

ACTG1 kodiert zytoplasmatisches Gamma-Aktin, eine hochkonservierte Aktin-Isoform, die zu Mikrofilamenten polymerisiert und so Zellform, kortikale Spannung und mechanische Stabilität unterstützt. Die durch ACTG1 gesteuerte Aktin-Dynamik koordiniert zentrale Prozesse wie Zellmigration, Zytokinese, Membrantransport und die Bildung von Adhärenzverbindungen und ist dabei in aktinregulatorische Signalwege wie die Rho-Familie der GTPasen sowie Netzwerke von Aktin-bindenden Proteinen eingebunden. In der Humanbiologie werden Veränderungen der ACTG1-Funktion und der Homöostase des Aktinzytoskeletts mit Defekten in sensorischen und entwicklungsbiologischen Systemen in Verbindung gebracht und häufig im Kontext zytoskelettaler Umstrukturierungen bei Stressantworten und der Gewebemorphogenese untersucht. Da die Aktin-Architektur Transkriptionsprogramme und Mechanotransduktion beeinflusst, ist ACTG1 auch für Untersuchungen von Zellzustandsübergängen und zytoskelettabhängiger Signalübertragung relevant.

Das ACTG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ACTG1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ACTG1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ACTG1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ACTG1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ACTG1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ACTG1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ACTG1-Exone abzielen, die für die ACTG1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ACTG1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ACTG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ACTG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ACTG1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ACTG1 HDR-Plasmid (h) und ACTG1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ACTG1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ACTG1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.