ACTA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400003

概要

ACTA2は、血管平滑筋細胞および活性化筋線維芽細胞における収縮装置の中核成分であるα-平滑筋アクチン（α-SMA）をコードしています。ACTA2はアクチンストレスファイバーに組み込まれ、細胞収縮性、細胞骨格の組織化、メカノトランスダクションを調節することで、遊走、接着、細胞外マトリックス（ECM）リモデリングなどの過程に影響を与えます。アクチン動態およびRhoA/ROCK依存的な収縮シグナル伝達を介して、ACTA2は血管トーンや組織の硬さに対する応答に寄与します。ACTA2の発現や機能の異常は血管病態や線維増殖性リモデリングと関連しており、平滑筋分化や線維化関連表現型の研究における重要性を裏付けています。

ACTA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるACTA2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ACTA2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ACTA2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ACTA2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ACTA2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ACTA2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ACTA2の機能に不可欠なACTA2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ACTA2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ACTA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびACTA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ACTA2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ACTA2 HDRプラスミド（h）および ACTA2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはACTA2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のACTA2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。