ACSVL1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405122-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ACSVL1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ACSVL1 Double-Nickase-Plasmid (h) und ACSVL1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC27A2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ACSVL1: sc-393906
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ACSVL1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405122-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACSVL1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405122-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC27A2 kodiert die Acyl‑CoA‑Synthetase für sehr langkettige Fettsäuren 1 (ACSVL1/FATP2), ein membranassoziiertes Enzym, das langkettige und sehr langkettige Fettsäuren zu Acyl‑CoA‑Thioestern aktiviert und damit deren Einschleusung in die β‑Oxidation, die Synthese komplexer Lipide und das Lipid‑Remodeling ermöglicht. Durch die Kontrolle der Fettsäureaufnahme und der intrazellulären Aktivierung beeinflusst ACSVL1 den mitochondrialen und peroxisomalen Lipidstoffwechsel, die Energiehomöostase sowie zelluläre Antworten auf die Nährstoffverfügbarkeit. Eine fehlregulierte Fettsäureverarbeitung unter Beteiligung von SLC27A2 wurde in metabolischen Phänotypen wie hepatischer Steatose und Insulinresistenz untersucht, ebenso wie in veränderten lipidmetabolischen Programmen, die für Entzündung und die Bioenergetik von Tumorzellen relevant sind. Diese Eigenschaften machen ACSVL1 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um lipidgetriebene Signalwege und metabolische Reprogrammierung in humanen Zellmodellen zu analysieren.
ACSVL1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC27A2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC27A2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC27A2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC27A2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.