ACSS1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403211-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ACSS1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ACSS1 Double-Nickase-Plasmid (h) und ACSS1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ACSS1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ACSS1: sc-377149
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ACSS1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403211-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACSS1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403211-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACSS1 kodiert eine mitochondriale Acyl‑CoA‑Synthetase, die die Umwandlung von Acetat zu Acetyl‑CoA katalysiert und damit die Acetatverwertung mit dem mitochondrialen Energiestoffwechsel sowie anaplerotischen Flüssen durch den Citratzyklus (TCA‑Zyklus) verknüpft. Durch die Bereitstellung von Acetyl‑CoA für den oxidativen Stoffwechsel und die Unterstützung lipid- und ketonkörperassoziierter Stoffwechselwege trägt ACSS1 zur metabolischen Flexibilität bei Nährstoffstress und veränderter Substratverfügbarkeit bei. Eine fehlregulierte Acetatmetabolisierung und die mitochondriale Acetyl‑CoA‑Produktion sind relevant für Untersuchungen zur metabolischen Reprogrammierung, wie sie in der Krebsbiologie, bei Insulinresistenz und anderen Erkrankungen mit beeinträchtigtem oxidativem Stoffwechsel beobachtet wird. ACSS1 ist daher ein nützliches Ziel zur Untersuchung der mitochondrialen Substratwahl, der Kompartimentierung von Acetyl‑CoA und der nachgeschalteten Auswirkungen auf den Redoxhaushalt und die zelluläre Bioenergetik.
ACSS1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACSS1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACSS1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACSS1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACSS1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.