ACSL4 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401649-LAC

ACSL4 (membro 4 da família das acil-CoA sintetases de cadeia longa) é uma ligase de acil-CoA humana que ativa preferencialmente ácidos gordos polinsaturados, como o ácido araquidónico, encaminhando-os para a remodelação de fosfolípidos e para a biossíntese de mediadores lipídicos. Ao moldar a composição de fosfolípidos das membranas, a ACSL4 influencia a sensibilidade à ferroptose, as respostas ao stress oxidativo e a sinalização associada a eicosanoides, ligando o metabolismo lipídico à morte celular regulada e a programas inflamatórios. A atividade e a expressão desreguladas da ACSL4 têm sido associadas a alterações na dinâmica da peroxidação lipídica observadas em modelos de biologia do cancro, neurodegeneração e doenças metabólicas, tornando-a um alvo relevante para estudos mecanísticos de fenótipos impulsionados por lípidos. Assim, a ACSL4 é amplamente estudada em vias que integram a ativação de ácidos gordos, a remodelação de membranas e a regulação do destino celular.

As Partículas de Ativação Lentivirais ACSL4 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ACSL4 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ACSL4 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ACSL4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de ACSL4. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ACSL4 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.