acrogranin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420696

Descripción general

Grn codifica acrogranina (progranulina), una glicoproteína secretada y asociada a los lisosomas que modula el crecimiento y la supervivencia celular, así como la señalización inflamatoria en diversos tejidos. En el ratón, la acrogranina participa en la homeostasis endolisosomal y la proteostasis, y puede influir en vías relacionadas con la activación de la microglía, las redes de citocinas y la remodelación de la matriz extracelular. La alteración de la función de GRN/acrogranina se ha vinculado con la neurodegeneración, respuestas inmunitarias aberrantes y fenotipos de reparación tisular, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la neuroinflamación y la biología del estrés lisosomal. Los procesos dependientes de Grn también son relevantes en modelos de remodelación metabólica y fibrótica, donde convergen los factores de crecimiento secretados y la función lisosomal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO acrogranin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Grn en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Grn junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Grn tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína acrogranin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Grn para la investigación de la señalización de acrogranin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Grn críticos para la función de acrogranin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Grn para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido acrogranin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido acrogranin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Grn. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR acrogranin (m) y el plásmido HDR acrogranin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Grn para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Grn definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.