Plásmido CRISPR de Activación (h) ACLP/AEBP1: sc-403540-ACT

AEBP1 codifica la proteína 1 de unión al potenciador de adipocitos, también conocida como ACLP, una proteína asociada a la matriz extracelular implicada en la organización del colágeno, la diferenciación de células mesenquimales y la regulación de la remodelación tisular. En células humanas, la actividad de AEBP1 se vincula a programas de activación de fibroblastos y a la comunicación cruzada con la señalización TGF-β/SMAD y con vías de adhesión mediadas por integrinas que coordinan el depósito de matriz extracelular y la detección de rigidez. La expresión desregulada de AEBP1 se ha asociado con fenotipos fibróticos y con la remodelación del estroma observada en microambientes inflamatorios y en el estroma asociado a tumores. Estas características hacen de AEBP1 una herramienta molecular útil para estudiar la biología de la matriz, la señalización célula–matriz y los programas transcripcionales que gobiernan la homeostasis del tejido conectivo.

ACLP/AEBP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AEBP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ACLP/AEBP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AEBP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AEBP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ACLP/AEBP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AEBP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ACLP/AEBP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ACLP/AEBP1 en células tumorales con expresión de AEBP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.