Acid Ceramidase CRISPR 활성화 플라스미드(m): sc-419216-ACT
- Target species: mouse
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- Acid Ceramidase CRISPR Activation Plasmid (m) 는 synergistic activation mediator (SAM) transcription activation system으로 특정유전자 발현을 upregulate하도록 디자인되였습니다.
- Acid Ceramidase CRISPR 활성화 플라스미드(m)는 1:1:1의 질량 비율로 3개의 플라스미드로 구성되어 있습니다: 비활성화된 Cas9(dCas9) 뉴클레아제(D10A 및 N863A)를 트랜스활성화 도메인 VP64에 융합한 플라스미드와 블라스티시딘 저항 유전자; MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 코딩하는 플라스미드와 하이그로마이신 저항 유전자; 표적 특이적인 20nt 가이드 RNA가 두 개의 MS2 RNA 아파테머에 융합되어 있고, 푸로마이신 내성 유전자
- The resulting SAM complex binds to a site-specific region approximately 200-250 nt upstream of the transcriptional start site and provides robust recruitment of transcription factors for highly efficient gene activation
- Acid Ceramidase CRISPR 활성화 플라스미드 (m) 및 Acid Ceramidase CRISPR 활성화 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는 gRNA는 Asah1 전사 개시점 상류의 서로 다른 조절 영역을 표적으로 합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 사용할 수 있습니다
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
Acid Ceramidase CRISPR 활성화 플라스미드(m) | sc-419216-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
Acid Ceramidase CRISPR 활성화 플라스미드(m2) | sc-419216-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
마우스 Asah1은 산성 세라마이드분해효소(acid ceramidase)를 암호화하며, 이는 세포소기관인 리소좀의 가수분해효소로서 세라마이드를 탈아실화하여 스핑고신과 유리 지방산을 생성함으로써 스핑고지질의 저장과 분해(턴오버) 사이의 균형을 조절합니다. 산성 세라마이드분해효소는 세라마이드와 스핑고신 풀(pool)을 조절함으로써, 리소좀 의존적 막 수송, 자가포식, 그리고 세포 생존 및 염증 반응과 연관된 스트레스 반응성 신호전달 네트워크에 영향을 미칩니다. ASAH1 활성의 장애는 스핑고지질 축적과 리소좀 기능 이상과 관련되며, 이 경로를 신경퇴행성 및 전신 대사성 표현형과 연결합니다. 따라서 Asah1은 마우스의 세포 및 생체(in vivo) 모델에서 세라마이드 중심의 지질 신호전달과 리소좀 항상성을 연구하기 위한 핵심 노드입니다.
Acid Ceramidase CRISPR 활성화 플라스미드(m)는 기본 DNA 서열을 변경하지 않고 내인성 Asah1 발현을 상향 조절하는 표적화된 비파괴적 접근법을 제공합니다.
Acid Ceramidase CRISPR 활성화 플라스미드(m)는 인간 세포주에서 Asah1 유전자좌의 고효율, 위치 특이적 전사 상향 조절을 위해 설계된 3개의 플라스미드로 구성된 시너지 활성화 매개체(SAM) 시스템입니다. 이 시스템은 DNA 결합 능력은 유지하면서 뉴클레아제 활성을 제거하는 두 가지 비활성화 돌연변이(D10A 및 N863A)를 지닌 촉매 활성 없는 Cas9(dCas9)을 중심으로 구축되었습니다. 이 dCas9은 강력한 전사 활성화제인 VP64와 융합되어 있으며, 선별을 위해 블라스티시딘 내성 유전자와 함께 발현됩니다. 두 번째 플라스미드는 dCas9-VP64와 협동하여 작용하는 2차 활성화 복합체인 MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 암호화하며, 히그로마이신 내성 유전자와 함께 존재한다. 세 번째 플라스미드는 표적 특이적 20nt sgRNA를 암호화하며, 이는 MS2-p65-HSF1 복합체를 활성화 부위로 유인하는 두 개의 MS2 RNA 아파타머와 융합되어 있으며, 푸로마이신 내성 유전자가 함께 포함되어 있습니다. 세 플라스미드는 모든 시스템 구성 요소의 균형 잡힌 발현을 위해 질량비 1:1:1로 전달됩니다.
표적 부위에 조립되면 SAM 복합체는 Asah1 전사 시작점의 상류 약 200bp 지점에 결합하며, 이곳에서 VP64, p65 및 HSF1이 협력하여 전사 기구를 모집하고 내인성 Acid Ceramidase 발현의 상향 조절을 유도합니다. 핵산분해 활성을 가진 Cas9과 달리, dCas9은 이중 가닥 절단을 유발하거나 게놈 서열을 변형시키지 않아, 원형 Asah1 위치를 보존하고 내인성 위치에서 Acid Ceramidase 의존적 전사 반응을 연구할 수 있게 하여, 기능 연구, 표적 유전자 식별 및 Asah1 발현이 침묵되거나 감소된 종양 세포에서 Acid Ceramidase 경로 복원을 모델링하는 데 유용한 도구입니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.