ACADS Double Nickaseプラスミド (h): sc-405458-NIC

ACADSは、ミトコンドリア内のフラボタンパク質である短鎖アシルCoA脱水素酵素をコードしており、短鎖脂肪酸アシルCoAのβ酸化における最初の脱水素反応段階を触媒します。これにより、飢餓時や代謝ストレス下における脂肪酸分解とエネルギー産生が結び付けられます。ACADSは電子を電子伝達フラボタンパク質（ETF）系および下流の呼吸鎖成分へ受け渡すことで、ミトコンドリアのレドックスバランスを維持し、脂肪酸酸化経路を効率よく進めるためのフラックスを支えます。ACADS機能の異常は、短鎖脂肪酸酸化の障害、代謝性アシドーシス、ならびに短鎖アシルCoA脱水素酵素欠損症でみられる神経筋症状と関連しており、先天代謝異常の研究において重要です。ACADSはまた、ヒト細胞におけるミトコンドリア代謝、酸化ストレス応答、脂質由来シグナル伝達を検討するための有用な結節点にもなります。

ACADS ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ACADS 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ACADS内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ACADSの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ACADSが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。