Plasmide Double Nickase (m) ABHD12: sc-429273-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) ABHD12 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ABHD12 Double Nickase (m) et le plasmide ABHD12 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Abhd12. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) ABHD12 | sc-429273-NIC | 20 µg | $410.00 |
Abhd12 chez la souris code ABHD12, une hydrolase à sérine associée à la membrane qui agit comme lipase des lysophosphatidylsérines, régulant ainsi les pools de lipides bioactifs et la signalisation médiée par les lipides dans les systèmes nerveux et immunitaire. En contrôlant le renouvellement des lysophosphatidylsérines, ABHD12 influence les états d’activation de la microglie, le niveau de neuro-inflammation et, plus largement, les processus de remodelage des phospholipides liés à l’homéostasie cellulaire. La perturbation génétique d’ABHD12 est associée à des phénotypes neurodégénératifs dans des systèmes modèles, faisant d’Abhd12 un nœud pertinent pour étudier la dérégulation lipidique, la neuro-inflammation et les voies impliquées dans le maintien neuronal. Les travaux sur ABHD12 sont fréquemment utilisés pour explorer des réseaux de signalisation lipidique qui relient le métabolisme membranaire aux fonctions immunitaires et neuronales.
ABHD12 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Abhd12 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Abhd12. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Abhd12. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Abhd12.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.