ABCA13 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407004-ACT

ABCA13は、大型のATP結合カセット（ABC）トランスポーターをコードしており、ATP依存的に細胞膜を介した脂質の移動（トランスロケーション）に関与することで、膜構造の維持や細胞内輸送を支えると考えられています。ABCAサブファミリーの一員であるABCA13は、脂質およびコレステロールの取り扱いに関わる過程と関連し、小胞輸送、エンドソーム–リソソーム動態、ならびに上皮細胞の恒常性に影響し得ます。ABCA13発現の変化は肺の生物学で報告されており、がん関連および神経精神疾患関連のデータセットとの関連も示されています。これにより、トランスポーターによる脂質リモデリングがシグナル伝達や細胞分化にどのように影響するかを検討する研究が促されています。これらの特徴からABCA13は、ヒト細胞モデルにおける脂質輸送経路、膜組成依存的なシグナル伝達、そして疾患関連の転写プログラムを調べるための有用な標的となります。

ABCA13 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ABCA13の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ABCA13 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ABCA13 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はABCA13転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ABCA13の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のABCA13遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるABCA13依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびABCA13発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるABCA13経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。