AATK Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408483-ACT

AATK (quinase de tirosina associada à apoptose), também conhecida como quinase de tirosina lemur 1, é uma quinase de serina/treonina implicada na diferenciação neuronal, no crescimento de neuritos e na regulação da sinalização apoptótica. Em células humanas, a atividade de AATK interage com sinalização relacionada a MAPK e com programas de remodelação do citoesqueleto que moldam decisões de destino celular, incluindo parada de crescimento e sobrevivência sob estresse. Alterações de expressão e perturbações funcionais de AATK têm sido associadas a estados de diferenciação alterados e a vias desreguladas de morte celular, processos frequentemente estudados em modelos de neurobiologia e de células cancerosas. Como regulador ligado a quinase de programas transcricionais e estruturais, AATK oferece um ponto acessível para dissecar mecanismos que conectam sinalização ao comprometimento de linhagem e às respostas ao estresse.

AATK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AATK sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AATK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AATK em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AATK, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AATK. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AATK nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AATK no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AATK em células tumorais com expressão de AATK silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.