A1BG Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403087-ACT

A alfa-1B-glicoproteína (A1BG) codifica uma glicoproteína plasmática secretada da superfamília das imunoglobulinas, abundante na circulação e detectada em múltiplos tecidos. Embora sua função molecular exata permaneça incompletamente definida, a A1BG tem sido implicada em interações extracelulares proteína–proteína e na modulação de processos imunes e inflamatórios, com associações relatadas a estresse oxidativo e a sinalização relacionada à proteostase no meio extracelular. Alterações na expressão de A1BG foram observadas em diversos contextos patológicos, incluindo estados metabólicos e inflamatórios e vários cânceres, apoiando seu uso como um gene associado a biomarcadores para estudos mecanísticos. Em modelos celulares humanos, a perturbação de A1BG oferece uma via para investigar as vias que governam redes de glicoproteínas secretadas, inflamação sistêmica e sinalização do microambiente associada a tumores.

A1BG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de A1BG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

A1BG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus A1BG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição A1BG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de A1BG. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus A1BG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de A1BG no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via A1BG em células tumorais com expressão de A1BG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.