5α-Reductase 1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402151-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- 5α-Reductase 1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- 5α-Reductase 1ダブルニカースプラスミド（h）および5α-Reductase 1ダブルニカースプラスミド（h2）は、SRD5A1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
5α-Reductase 1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402151-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
5α-Reductase 1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402151-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SRD5A1は、ヒトの5α-リダクターゼ1をコードする遺伝子であり、主として小胞体に局在するNADPH依存性の酸化還元酵素です。この酵素はテストステロンをジヒドロテストステロン（DHT）へ変換し、より広範なステロイド代謝にも関与します。局所のアンドロゲン量を調節することで、SRD5A1はアンドロゲン受容体シグナル伝達およびその下流の転写プログラムに影響を及ぼし、細胞分化、増殖、組織恒常性を規定します。SRD5A1の発現や活性の変化は、内分泌・代謝の文脈や、アンドロゲン応答性疾患の病態生物学（ステロイドバランス異常やホルモン駆動性腫瘍モデルを含む）において研究されてきました。そのためSRD5A1は、ヒト細胞におけるステロイド産生フラックス、アンドロゲンシグナルのクロストーク、状況依存的な遺伝子制御を解明する目的で、しばしば解析対象となります。
5α-Reductase 1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SRD5A1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SRD5A1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SRD5A1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SRD5A1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。