4E-BP2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420150
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- 4E-BP2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico 4E-BP2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
4E-BP2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420150 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Eif4ebp2 codifica 4E-BP2, un represor de la traducción sensible a la fosforilación que se une a eIF4E y modula el ensamblaje del complejo de iniciación de la traducción eIF4F dependiente del cap. Como efector downstream del eje de señalización PI3K–AKT–mTOR, 4E-BP2 integra señales de nutrientes, factores de crecimiento y estrés para ajustar la traducción global y la traducción selectiva de determinados ARNm. En tejidos de ratón, 4E-BP2 contribuye a la proteostasis y a programas de síntesis proteica dependientes de la actividad, vinculando el control translacional con el crecimiento celular, la adaptación metabólica y la diferenciación. La desregulación de la señalización mTOR–4E-BP y la traducción aberrante dependiente del cap se asocian con frecuencia a fenotipos proliferativos y neurobiológicos, lo que convierte a Eif4ebp2 en un nodo útil para estudios mecanísticos del control de la traducción.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO 4E-BP2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Eif4ebp2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Eif4ebp2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Eif4ebp2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína 4E-BP2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Eif4ebp2 para la investigación de la señalización de 4E-BP2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Eif4ebp2 críticos para la función de 4E-BP2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Eif4ebp2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido 4E-BP2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido 4E-BP2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Eif4ebp2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR 4E-BP2 (m) y el plásmido HDR 4E-BP2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Eif4ebp2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Eif4ebp2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.