4.1N CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420184

概要

Epb41l1は、タンパク質4.1ファミリーに属する神経細胞で高発現のタンパク質4.1Nをコードしており、細胞皮質のアクチン／スペクトリンネットワークを形質膜に連結して、細胞形態と膜の力学的特性を安定化します。4.1Nは神経細胞膜およびシナプスにおける足場（スキャフォールド）因子として働き、タンパク質複合体の組み立てを協調的に制御することで、神経突起伸長、シナプス構築、ならびに小胞輸送に影響を与えます。こうした細胞骨格と膜のカップリング機能を通じて、Epb41l1は神経系の発生と可塑性に重要な軸索ガイダンスや活動依存的リモデリングといった過程に寄与します。4.1N関連の膜—細胞骨格アーキテクチャの破綻は、神経回路の連結性や興奮性の変化が主要な細胞表現型となる神経発達障害および神経変性の機序研究において重要な検討対象です。

4.1N CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEpb41l1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Epb41l1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Epb41l1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、4.1Nタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、4.1Nシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Epb41l1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• 4.1Nの機能に不可欠なEpb41l1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Epb41l1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• 4.1N CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）および4.1N CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Epb41l1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  4.1N HDRプラスミド（m）および 4.1N HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEpb41l1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEpb41l1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。