Plasmide CRISPR d'Activation (m) 3632451O06Rik: sc-426549-ACT

Le gène murin 3632451O06Rik code une protéine encore largement non caractérisée, avec une annotation fonctionnelle limitée, ce qui en fait une cible intéressante pour cartographier les réseaux de régulation génique et les phénotypes cellulaires dépendants du contexte. Des données émergentes au niveau des transcrits suggèrent que 3632451O06Rik pourrait participer à des processus de contrôle de l’état cellulaire tels que la prolifération, l’adaptation au stress et la différenciation, dans lesquels de modestes variations d’expression peuvent modifier l’activité des voies. Comme ce gène est peu intégré aux cartes de signalisation curées, des perturbations contrôlées sont précieuses pour relier l’expression de 3632451O06Rik à des programmes transcriptionnels en aval et à des modules d’interactions protéiques. De telles études peuvent étayer une biologie pertinente pour les maladies en identifiant des associations avec des signatures d’expression génique aberrantes observées dans des contextes d’inflammation, de neurobiologie et de modèles de cancer, sans suggérer une utilité clinique.

3632451O06Rik Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de 3632451O06Rik sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

3632451O06Rik Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus 3632451O06Rik dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription 3632451O06Rik, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de 3632451O06Rik. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus 3632451O06Rik natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de 3632451O06Rik au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie 3632451O06Rik dans les cellules tumorales présentant une expression de 3632451O06Rik silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.