γ Enolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420179

概要

Eno2は、解糖系酵素であるγ-エノラーゼ（ニューロン特異的エノラーゼ）をコードしており、2-ホスホグリセリン酸をホスホエノールピルビン酸へ変換する反応を触媒して、ニューロンのエネルギー代謝を支えています。マウスではγ-エノラーゼはニューロンおよび神経内分泌組織で高発現しており、中心炭素代謝を、分化・生存・ストレス適応に関わる細胞プログラムと結び付けています。ENO2/γ-エノラーゼの発現変化は、ニューロンおよび神経内分泌細胞の状態を示すマーカーとして広く用いられており、神経変性、低酸素／虚血性障害、腫瘍代謝に関連する機構とも関連付けられています。これらの特性により、Eno2は、神経系における代謝の再配線や細胞種特異的な制御を研究するための有用な切り口となります。

γ Enolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEno2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Eno2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Eno2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、γ Enolaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、γ Enolaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Eno2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• γ Enolaseの機能に不可欠なEno2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Eno2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• γ Enolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびγ Enolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Eno2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  γ Enolase HDRプラスミド（m）および γ Enolase HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEno2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEno2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。