γB-crystallin CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-402939

개요

CRYGB는 척추동물 눈 수정체에서 매우 풍부하게 존재하는 용해성 구조 단백질인 γB-크리스탈린을 암호화하며, 굴절률과 수정체의 장기적 투명성 유지에 기여합니다. γB-크리스탈린은 크리스탈린 네트워크 조립과 단백질 항상성(protein homeostasis) 과정에 관여해 수정체 섬유세포의 무결성을 유지하는데, 이때 빛 산란을 최소화하려면 단백질의 치밀한 배열과 안정성이 필수적입니다. 크리스탈린의 안정성이 깨지거나 응집(aggregation)에 대한 취약성이 증가하면 수정체 혼탁과 연관된 표현형이 나타나므로, CRYGB는 분화된 안구 조직에서 단백질 오접힘과 단백질 항상성 조절(프로테오스타시스) 메커니즘을 연구하는 데 중요한 유전자 좌위입니다. 또한 수정체 섬유세포는 대부분 분열을 하지 않는(post-mitotic) 세포이기 때문에, CRYGB는 수명이 긴 단백질이 시간에 따라 산화 및 환경 스트레스에 어떻게 반응하는지 조사하는 모델로도 활용됩니다.

γB-crystallin CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 CRYGB 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 CRYGB 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 CRYGB의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 γB-crystallin 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 γB-crystallin 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 CRYGB 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• γB-crystallin 기능에 중요한 CRYGB 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 CRYGB 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• γB-crystallin CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 γB-crystallin CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 CRYGB 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  γB-crystallin HDR 플라스미드 (h) 및 γB-crystallin HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 CRYGB 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 CRYGB 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.