γ1-Adaptin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403986-ACT

AP1G1は、アダプタータンパク質複合体1（AP-1）を構成するヒトγ1-アダプチン（γ1-adaptin）サブユニットをコードします。AP-1は、トランスゴルジネットワークおよびエンドソームにおいて、カーゴを選別し、クラスリン介在性小胞形成を駆動する中心的なコート構成要素です。γ1-アダプチンは膜貫通タンパク質上のソーティングモチーフを認識することで、受容体のリサイクリング、リソソームへの輸送、極性膜輸送の協調に寄与し、その結果、シグナル伝達の持続時間や膜組成に影響を与えます。AP-1依存的なトラフィッキングは、エンドソーム成熟やオートファジー‐リソソーム経路とも連携し、プロテオスタシスおよび調節性分泌を支えます。アダプター複合体機能や小胞輸送ダイナミクスの変化は、神経発達表現型、免疫細胞における受容体トラフィッキング、ならびに複数の疾患状況で認められる増殖因子シグナルの制御異常に関する研究全般に広く関連します。

γ1-Adaptin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AP1G1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

γ1-Adaptin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AP1G1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAP1G1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性γ1-Adaptinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAP1G1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるγ1-Adaptin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAP1G1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるγ1-Adaptin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。