β-NAP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411126-ACT

ヒトAP3B2は、トランスゴルジネットワークおよびエンドソーム区画からリソソームや関連オルガネラへの貨物選別と輸送を媒介するアダプタータンパク質複合体3（AP-3）の、ニューロンに豊富なβサブユニットであるβ-NAPをコードする。β-NAPは、シナプス小胞の生合成や調節性分泌に不可欠な小胞の形成と標的化を支え、AP3B2をエンドリソソーム系のソーティング、膜タンパク質の局在制御、ならびに神経細胞の恒常性と結び付けている。AP-3依存性輸送が撹乱されると、神経伝達物質放出やオルガネラ成熟が変化し得るため、AP3B2は神経発達や神経変性に関連する機構を研究する上で重要な結節点となる。したがって、AP3B2の発現および機能は、小胞輸送、シナプス機能、エンドソーム—リソソーム動態に関わる経路の評価指標として広く用いられている。

β-NAP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AP3B2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

β-NAP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AP3B2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAP3B2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性β-NAPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAP3B2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるβ-NAP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAP3B2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるβ-NAP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。