β-Gal 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-401194-NIC
- Target species: human
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- β-Gal Double Nickase Plasmid (h) 는 한쌍의D10A mutated Cas9 nuclease 와 타깃특정 20 nt guide RNA (gRNA)를 인코딩하는 plasmid를 포함하고있으며 gRNA는 대응 CRISPR/Cas9 KO보다 높은 특이성을 띤 knockout gene을 발현하도록 디자인되였습니다.
- 한쌍의 gRNA는 약 20bp가량 떨어져 있으며 이는 게놈DNA의 Cas9-mediated double nicking을 발생하여 DSB를 모방합니다.
- 한쌍의 plasmid 중 하나는 selection에 필요한 puromycin-resistance gene을, 다른하나는 형질주입효율을 확인하는 GFP marker를 보유하고있습니다.
- β-Gal 더블 니케이스 플라스미드 (h) 및 β-Gal 더블 니케이스 플라스미드 (h2)는 GLB1을 표적하는 서로 다른 쌍을 이루는 gRNA 설계를 암호화합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 이용 가능할 수 있습니다
- Transfection, gene knockout효율은 WB, IF나 IHC등 방법으로 측정할수있습니다, 권장하는 항체는 β-Gal Antibody (B-12): sc-377257
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
β-Gal 더블 틈내기효소 플라스미드 (h) | sc-401194-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β-Gal 더블 틈내기효소 플라스미드 (h2) | sc-401194-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GLB1은 인간 β-갈락토시다아제(β-Gal)를 암호화하며, 이는 리소좀의 엑소글리코시다아제로서 GM1 강글리오사이드, 당단백질, 글리코사미노글리칸에서 말단 β-갈락토스 잔기를 가수분해합니다. 이 활성은 리소좀의 분해 대사 플럭스와 글리코스핑고지질의 회전을 뒷받침하며, 엔도-리소좀 수송, 자가포식–리소좀 기능, 그리고 세포 품질관리 경로와 맞물려 작동합니다. GLB1의 기능이 깨지면 기질 제거가 저해되어 GM1 강글리오사이드증과 모르키오 B병을 포함한 리소좀 축적 질환과 연관되므로, 리소좀 기능장애를 연구하는 데 유용한 모델 유전자로 활용됩니다. 따라서 GLB1은 신경퇴행과 연관된 스트레스 반응, 대사 재편, 그리고 당사슬 처리 장애가 초래하는 세포 수준의 결과를 다루는 맥락에서 자주 연구됩니다.
β-Gal 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 GLB1 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 GLB1 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 GLB1의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.
편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, GLB1 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.