β-Arrestin-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-416686-NIC

ARRB2はヒトのβ-アレスチン2をコードしており、活性化されたGPCR（Gタンパク質共役受容体）の下流シグナルを、受容体の脱感作・内在化・輸送を促進することで終結させ、さらに再構成する多機能アダプターである。β-アレスチン2は、典型的なGタンパク質のアンカップリングにとどまらず、MAPK/ERK、PI3K–AKT、NF-κBなどのシグナル伝達モジュールの足場として機能し、転写プログラム、細胞骨格ダイナミクス、炎症応答に影響を及ぼす。さらに、エンドサイトーシス機構やユビキチン化経路とも連携して、受容体の運命やシグナル持続時間を制御する。β-アレスチン偏向型シグナル伝達の破綻やARRB2発現の変化は、腫瘍関連シグナル、免疫細胞活性化、線維化、神経精神・代謝表現型など、さまざまな疾患関連プロセスに関与すると示唆されている。

β-Arrestin-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ARRB2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ARRB2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ARRB2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ARRB2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。