β3Gn-T2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406310

概要

B3GNT2は、ヒトβ3Gn-T2（β-1,3-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ）をコードしており、ゴルジ体内でN-結合型およびO-結合型糖鎖、ならびに一部の糖脂質上のポリN-アセチルラクトサミン（polyLacNAc）鎖を伸長します。β3Gn-T2は、さらなる分岐形成や末端修飾（シアル化やフコース化を含む）の基盤となる糖鎖スキャフォールドの利用可能性を調節することで、レクチン相互作用、細胞間接着、受容体輸送に影響を与えます。この糖鎖付加活性は、膜タンパク質の安定性や細胞外マトリックスとの情報伝達を形作る糖鎖生合成経路に組み込まれています。文献では、polyLacNAc発現の変化やB3GNT2に関連する糖鎖付加パターンが、腫瘍細胞の挙動や免疫認識の変化と関連することが示されており、がんおよび免疫学モデルにおける機構研究を支持しています。

β3Gn-T2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるB3GNT2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、B3GNT2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、B3GNT2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、β3Gn-T2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、β3Gn-T2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、B3GNT2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• β3Gn-T2の機能に不可欠なB3GNT2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、B3GNT2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• β3Gn-T2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびβ3Gn-T2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、B3GNT2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  β3Gn-T2 HDRプラスミド（h）および β3Gn-T2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはB3GNT2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のB3GNT2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。