Plásmido Doble Nickase (h) β1 Tubulin: sc-400113-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)β1 Tubulin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa β1 Tubulin (h) y el plásmido de doble nickasa β1 Tubulin (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TUBB1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: β1 Tubulin Anticuerpo (908G2X): sc-517652
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) β1 Tubulin | sc-400113-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) β1 Tubulin | sc-400113-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBB1 codifica la β1-tubulina humana, un isotipo de β-tubulina enriquecido en el linaje hematopoyético que polimeriza con las α-tubulinas para formar microtúbulos esenciales para la organización del citoesqueleto y el transporte intracelular. En megacariocitos y plaquetas, la β1-tubulina sostiene la formación de proplaquetas, el cambio de forma plaquetario y la integridad del anillo de microtúbulos, lo que la vincula con la dinámica del citoesqueleto, el tráfico vesicular y los procesos de división celular. La alteración del ensamblaje de microtúbulos o de la expresión de β1-tubulina puede perturbar la megacariopoyesis y la biogénesis plaquetaria, y las variantes de TUBB1 se asocian con trastornos plaquetarios hereditarios y con fenotipos de función plaquetaria alterada. Como componente estructural de la red de microtúbulos, la β1-tubulina también es relevante para estudios sobre la organización del huso mitótico, la remodelación del citoesqueleto y las relaciones genotipo–fenotipo en modelos de enfermedades hematológicas.
β1 Tubulin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TUBB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TUBB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TUBB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TUBB1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.