β1-Adaptin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402948

概要

AP1B1 は、トランスゴルジネットワーク（TGN）およびエンドソームにおいて、貨物（カーゴ）の認識をクラスリン介在性小胞形成へと結び付けるアダプタータンパク質複合体 1（AP-1）の β サブユニットである β1-アダプチンをコードします。AP-1 は膜貫通タンパク質上のソーティングモチーフに結合し、小型 GTPase や各種アクセサリー因子と協調することで、膜組成とシグナル伝達の恒常性を支える極性輸送、エンドソームリサイクリング、ならびにリソソーム指向性輸送を制御します。AP1B1 依存的なソーティングが破綻すると上皮の極性が乱れ、受容体の分布、栄養トランスポーターの局在、さらには細胞ストレス応答に関連するプロテオスタシス経路に変化が生じ得ます。AP1B1 の遺伝的多様性は神経発達や輸送異常に関連する表現型と関連付けられており、小胞輸送機能不全の機序解析において重要な標的となります。

β1-Adaptin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAP1B1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AP1B1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AP1B1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、β1-Adaptinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、β1-Adaptinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AP1B1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• β1-Adaptinの機能に不可欠なAP1B1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AP1B1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• β1-Adaptin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびβ1-Adaptin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AP1B1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  β1-Adaptin HDRプラスミド（h）および β1-Adaptin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAP1B1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAP1B1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。