α Enolase Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420178-ACT

O gene murino Eno1 codifica a α-enolase, uma metaloenzima glicolítica que catalisa a interconversão entre 2-fosfoglicerato e fosfoenolpiruvato, conectando o metabolismo central do carbono à homeostase energética celular. Além da glicólise, a α-enolase pode influenciar a ligação ao plasminogênio, respostas ao estresse e funções associadas a RNA, dependendo do contexto subcelular, relacionando o estado metabólico à dinâmica do citoesqueleto e à sinalização. Alterações na atividade e na expressão de ENO1 são frequentemente associadas à reprogramação metabólica e a microambientes inflamatórios, sustentando sua relevância para estudos de proliferação, respostas à hipóxia e modulação imune em modelos de doença. Em sistemas murinos, Eno1 é comumente investigado em vias que regulam a utilização de glicose, o equilíbrio redox e respostas adaptativas ao estresse nutricional.

α Enolase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Eno1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

α Enolase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Eno1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Eno1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de α Enolase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Eno1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de α Enolase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via α Enolase em células tumorais com expressão de Eno1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.