Plasmide CRISPR d'Activation (h) α8 Tubulin: sc-400076-ACT

TUBA8 code l’α8‑tubuline, un membre de la famille des α‑tubulines qui forme un hétérodimère avec la β‑tubuline pour constituer les microtubules, soutenant l’architecture du cytosquelette, le transport intracellulaire et l’organisation du fuseau mitotique. En régulant la dynamique des microtubules, l’α8‑tubuline contribue à des processus tels que la division cellulaire, la polarité et le trafic vésiculaire, en interagissant avec des protéines associées aux microtubules et des complexes moteurs. Des altérations de l’expression des isotypes de tubuline et le remodelage des microtubules sont associés à une prolifération dérégulée et à une organisation cellulaire aberrante dans les maladies humaines, faisant de TUBA8 une cible utile pour des études mécanistiques du contrôle du cytosquelette. TUBA8 est également pertinent pour étudier comment la composition en tubuline influence la stabilité des microtubules et les réponses de signalisation aux perturbations du cytosquelette.

α8 Tubulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TUBA8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

α8 Tubulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TUBA8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TUBA8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de α8 Tubulin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TUBA8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de α8 Tubulin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie α8 Tubulin dans les cellules tumorales présentant une expression de TUBA8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.