ZnT-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403094-ACT

SLC30A1はZnT-1をコードしており、ZnT-1は主に細胞膜に局在する亜鉛排出トランスポーターで、Zn2+を細胞外へ排出することで細胞質内の亜鉛恒常性を維持し、細胞内亜鉛毒性を抑制します。可動性（遊離）亜鉛プールを調節することにより、ZnT-1は金属依存性シグナル伝達、酸化ストレス応答、亜鉛を必要とする酵素や転写因子の活性に影響を与え、ひいてはより広範なプロテオスタシスやストレス適応経路にも影響します。亜鉛の取り扱いの変化やSLC30A1発現の変動は、金属過負荷やレドックス不均衡に対する細胞の感受性と関連づけられており、これらの過程は神経変性、炎症、がん関連表現型に関与するとされています。亜鉛フラックスのゲートキーパーとして、ZnT-1は金属ストレス、トランスポーター間のクロストーク、微量栄養素の利用可能性を遺伝子発現制御へ結びつける経路のモデルで、しばしば研究されています。

ZnT-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC30A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ZnT-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC30A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC30A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ZnT-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC30A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZnT-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC30A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZnT-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。