ZNRF3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418162

Panoramica

ZNRF3 (zinc and ring finger 3) codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina transmembrana che agisce come regolatore a feedback negativo della segnalazione Wnt/β-catenina promuovendo l’ubiquitinazione e il turnover dei complessi recettoriali Frizzled e LRP5/6 sulla superficie cellulare. Attraverso interazioni con le R-spondine e i recettori LGR, ZNRF3 contribuisce a calibrare l’ampiezza della via, influenzando il mantenimento delle cellule staminali, l’omeostasi tissutale e i programmi di differenziamento. L’alterazione della regolazione dei recettori mediata da ZNRF3 può potenziare la segnalazione Wnt e modificare gli output trascrizionali che controllano proliferazione e impegno di linea. Alterazioni genetiche e funzionali di ZNRF3 sono state implicate nella biologia di malattie dipendenti da Wnt, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sul controllo della via.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ZNRF3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZNRF3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZNRF3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZNRF3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ZNRF3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZNRF3 per lo studio della segnalazione di ZNRF3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZNRF3 critici per la funzione di ZNRF3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZNRF3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ZNRF3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ZNRF3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZNRF3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ZNRF3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ZNRF3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZNRF3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZNRF3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.