ZNF71 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-410081-LAC

ZNF71 codifica uma proteína dedo de zinco com domínio KRAB que atua como regulador transcricional específico de sequência, tipicamente em conjunto com a maquinaria de remodelação da cromatina associada a KAP1/TRIM28, para moldar heterocromatina repressiva e ajustar finamente programas de expressão gênica. Como parte da rede mais ampla de dedos de zinco C2H2, ZNF71 está ligada ao controle de estados de diferenciação celular, ao silenciamento epigenético de elementos repetitivos e à manutenção da homeostase transcricional. A desregulação de fatores KRAB-ZNF é frequentemente estudada no contexto de paisagens transcricionais alteradas observadas no câncer e em outros distúrbios com instabilidade epigenética, tornando ZNF71 um nó relevante para investigar circuitos de fatores de transcrição. A pesquisa sobre ZNF71 comumente cruza vias que governam a acessibilidade da cromatina, a regulação de promotores/realçadores (enhancers) e a repressão ou ativação gênica dependente do contexto.

As Partículas de Ativação Lentivirais ZNF71 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ZNF71 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ZNF71 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ZNF71, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de ZNF71. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ZNF71 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.