ZNF326 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404968-ACT

ZNF326は、転写制御およびRNAプロセシングに関与するとされる亜鉛フィンガー含有核内タンパク質をコードしており、共転写的スプライシングや、細胞状態の維持を支える遺伝子発現プログラムの調整に役割を持つことが報告されています。クロマチン関連因子として、ZNF326はプロモーター近傍の制御アーキテクチャや、転写とpre-mRNA成熟の連携に影響し得るため、増殖・分化・ストレス適応的遺伝子発現を司る経路との関連が示唆されます。文献上では、ZNF326の発現や活性の破綻が、がん生物学をはじめ、異常なRNA代謝が疾患表現型に寄与する他の状況において、転写ネットワークの変化と関連づけられています。これらの特徴から、ZNF326は転写―スプライシングのクロストークや制御ネットワークの再配線の機構解明研究に有用な標的となります。

ZNF326 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ZNF326の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ZNF326 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ZNF326 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZNF326転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ZNF326の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZNF326遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZNF326依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZNF326発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZNF326経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。