Zic4 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-407517-NIC

ZIC4 codifica o fator de transcrição com dedos de zinco Zic4, um regulador nuclear que se liga ao DNA para controlar programas de expressão gênica durante o padrão embrionário e o neurodesenvolvimento. Zic4 participa de redes transcricionais que coordenam a diferenciação neuronal, a identidade regional no cérebro em desenvolvimento e a morfogênese do cerebelo, interagindo com vias de sinalização do desenvolvimento como WNT e SHH, que moldam estruturas da linha média dorsal e do rombencéfalo. Alterações na dosagem de ZIC4 ou a perturbação de sua função regulatória têm sido associadas a malformações cerebrais congênitas e fenótipos do neurodesenvolvimento, tornando esse locus útil para estudar o controle transcricional em linhagens neurais. Em modelos baseados em células, a perturbação de ZIC4 ajuda a definir redes regulatórias gênicas que governam decisões de destino de progenitores, maturação neuronal e estados de cromatina específicos de linhagem.

Zic4 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ZIC4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ZIC4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ZIC4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ZIC4 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.