Zic3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407048-ACT

ZIC3 codifica o fator de transcrição de dedos de zinco Zic3, uma proteína nuclear que se liga ao DNA e regula o padrão embrionário inicial e a especificação do eixo esquerda–direita. Zic3 modula redes regulatórias de genes envolvidas na formação do mesendoderma, no desenvolvimento neural e na sinalização dependente de cílios, que se integra a vias como NODAL/SMAD e WNT durante a morfogênese. A expressão ou função desregulada de ZIC3 está associada a defeitos de lateralidade e malformações congênitas, tornando-o um nó útil para o estudo de programas transcricionais do desenvolvimento. Em modelos celulares humanos, ZIC3 oferece uma leitura experimental acessível para investigar a especificação de linhagens, o controle do estado da cromatina em loci do desenvolvimento e a reconfiguração de redes dirigida por fatores de transcrição.

Zic3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZIC3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Zic3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZIC3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZIC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Zic3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZIC3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Zic3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Zic3 em células tumorais com expressão de ZIC3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.