Zic3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407048-ACT

ZIC3は亜鉛フィンガー型転写因子Zic3をコードしており、初期胚のパターニングと左右軸（左–右軸）形成を制御する、核内のDNA結合タンパク質です。Zic3は、中胚葉・内胚葉（メセンエンドダーム）形成、神経発生、ならびに形態形成の過程でNODAL/SMADやWNTなどの経路と統合される線毛依存性シグナル伝達に関与する遺伝子制御ネットワークを調節します。ZIC3の発現や機能の破綻は、左右軸異常や先天奇形と関連しており、発生における転写プログラムを研究するうえで有用な結節点となります。ヒト細胞モデルでは、ZIC3は系譜（リネージ）規定の解析、発生関連遺伝子座のクロマチン状態による制御、そして転写因子駆動のネットワーク再配線を調べるための扱いやすい指標を提供します。

Zic3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ZIC3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Zic3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ZIC3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZIC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Zic3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZIC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZic3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZIC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZic3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。