ZHX1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-407666-LAC

Zinc fingers and homeoboxes protein 1 (ZHX1) è un fattore di trascrizione nucleare che contiene motivi homeobox e dita di zinco e partecipa a programmi di espressione genica che controllano le decisioni sul destino cellulare, la differenziazione e la proliferazione. ZHX1 agisce comunemente come repressore trascrizionale attraverso interazioni con altri fattori nucleari e la modulazione di complessi regolatori associati alla cromatina, influenzando vie di segnalazione legate allo sviluppo e alla specificazione di linea cellulare. Un’alterata espressione di ZHX1 è stata riportata in molteplici contesti tumorali e in studi di biologia immunitaria e neuronale, a supporto della sua rilevanza nelle reti trascrizionali associate al cancro e nell’omeostasi tissutale. Queste caratteristiche rendono ZHX1 un bersaglio utile per analizzare i meccanismi endogeni di controllo trascrizionale e il rimodellamento delle vie a valle in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale ZHX1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ZHX1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ZHX1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ZHX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ZHX1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ZHX1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.