ZFHX4 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-429838-ACT

Zfhx4 は、マウスの亜鉛フィンガー・ホメオボックスタンパク質 ZFHX4 をコードしており、発生過程における長距離の転写制御に関与するとされる、大型の DNA 結合型転写因子です。ZFHX4 は系譜決定および神経分化プログラムの制御に関連し、クロマチン状態の調節や遺伝子発現ネットワークの協調的制御と結び付けられています。ZFHX4 の発現変化や制御機構の破綻は、神経発達に関わる表現型と関連付けられており、腫瘍生物学の研究でも報告されています。これらの知見は、増殖・分化・細胞アイデンティティを規定する経路における ZFHX4 の重要性を支持します。以上の特徴から、Zfhx4 はマウスモデル系において、転写回路の解析や疾患関連の遺伝子制御変化を調べるための有用な標的となります。

ZFHX4 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Zfhx4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ZFHX4 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Zfhx4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZfhx4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ZFHX4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZfhx4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZFHX4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZfhx4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZFHX4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。