ZDHHC9 Double Nickaseプラスミド (m): sc-431594-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ZDHHC9 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ZDHHC9ダブルニカースプラスミド（m）およびZDHHC9ダブルニカースプラスミド（m2）は、Zdhhc9を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ZDHHC9 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-431594-NIC | 20 µg | $410.00 |
Zdhhc9 は、DHHC ファミリーのパルミトイル基転移酵素である ZDHHC9 をコードしており、タンパク質基質の S-パルミトイル化を触媒することで、膜への結合、細胞内輸送、シグナルの区画化を調節します。ZDHHC9 は、シグナル伝達タンパク質の脂質修飾（リピド化）依存的な局在を制御することで、小胞動態や細胞間コミュニケーションを制御する経路に関与し、その下流で成長や分化プログラムにも影響を及ぼします。マウスの系では、DHHC によるパルミトイル化の変化が神経発達に関わる表現型やシグナルネットワークの破綻と関連づけられており、Zdhhc9 は翻訳後脂質修飾が細胞機能をどのように形作るかを研究する上で有用な結節点となります。その活性は、他のパルミトイル化関連因子や膜マイクロドメインの構造・組織化と併せて検討されることが多く、基質修飾を経路出力へと結び付けて理解するために用いられます。
ZDHHC9 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Zdhhc9 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Zdhhc9内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Zdhhc9の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Zdhhc9が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。