ZDHHC7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405072-ACT

O ZDHHC7 humano codifica uma palmitoiltransferase com domínio DHHC que catalisa a S-palmitoilação de proteínas substrato, uma modificação lipídica reversível que controla a associação à membrana, o tráfego, a estabilidade e a saída de sinalização. Ao moldar o panorama de palmitoilação ao longo das endomembranas, o ZDHHC7 contribui para processos como a localização de receptores e adaptadores, o transporte vesicular e a coordenação de vias de transdução de sinal a jusante. A palmitoilação desregulada está associada a alterações na homeostase proteica e a redes de sinalização aberrantes implicadas na transformação oncogénica e em fenótipos relacionados com a imunidade, tornando o ZDHHC7 um nó útil para estudos mecanísticos de regulação próxima à membrana. A investigação funcional do ZDHHC7 pode ajudar a definir como a triagem dependente de lipidação e a sinalização compartimentalizada influenciam o estado celular e vias relevantes para a doença.

ZDHHC7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZDHHC7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZDHHC7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZDHHC7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZDHHC7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZDHHC7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZDHHC7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZDHHC7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZDHHC7 em células tumorais com expressão de ZDHHC7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.