ZDHHC7 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405072-ACT

ヒトZDHHC7は、DHHCドメインをもつパルミトイルトランスフェラーゼをコードしており、基質タンパク質のS-パルミトイル化を触媒します。S-パルミトイル化は可逆的な脂質修飾で、膜への結合、トラフィッキング、安定性、ならびにシグナル出力を制御します。エンドメンブレン系におけるパルミトイル化の状態を形成することで、ZDHHC7は受容体やアダプターの局在、小胞輸送、下流シグナル伝達経路の協調などの過程に寄与します。パルミトイル化の制御破綻は、タンパク質恒常性の変化や、がん化や免疫関連表現型に関与する異常なシグナルネットワークと関連しており、そのためZDHHC7は膜近傍の制御機構を解明するための有用な結節点（ノード）となります。ZDHHC7の機能解析は、脂質化依存的なソーティングと区画化されたシグナル伝達が細胞状態および疾患関連経路にどのように影響するかを明らかにするのに役立ちます。

ZDHHC7 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ZDHHC7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ZDHHC7 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ZDHHC7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZDHHC7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ZDHHC7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZDHHC7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZDHHC7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZDHHC7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZDHHC7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。