ZBP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406434-ACT

ZBP1（Z-DNA結合タンパク質1；DAIとも呼ばれる）は、Z型核酸を認識し、病原体関連または損傷関連のシグナルを抗ウイルス応答および炎症応答へと結び付ける自然免疫センサーである。活性化されると、ZBP1はRIPK3とRHIM依存的に相互作用し、ネクロプトーシスを含む制御された細胞死プログラムを開始しうるほか、インターフェロン駆動性の転写ネットワークとも交差する。このシグナル伝達軸はパターン認識受容体（PRR）経路と統合され、ウイルス感染や細胞ストレスに応答してサイトカイン産生と細胞運命決定を調節する。ZBP1活性の制御不全は、異常なインターフェロンシグナル伝達、炎症性病態、ならびに免疫学および細胞死研究に関連するウイルス—宿主相互作用と結び付けられている。

ZBP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ZBP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ZBP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ZBP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZBP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ZBP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZBP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZBP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZBP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZBP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。