YAP Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423742-ACT

O gene Yap1 de camundongo codifica a YAP, um coativador de transcrição que atua como efetor central da via de sinalização Hippo, integrando sinais mecânicos, polaridade celular e dinâmica do citoesqueleto para controlar a proliferação, a resistência à apoptose e o crescimento tecidual. Ao se associar a fatores de transcrição da família TEAD, a YAP regula programas gênicos envolvidos no controle do tamanho de órgãos, na regeneração e em programas epitelial–mesenquimal. A atividade aberrante de YAP e a desregulação da via Hippo estão implicadas na transformação oncogênica, na fibrose e em alterações do comportamento de células-tronco/progenitoras, tornando Yap1 um alvo frequente em estudos de mapeamento de vias. Em modelos murinos, a transcrição dependente de YAP é amplamente utilizada para investigar o padrão de desenvolvimento e respostas dependentes do contexto à rigidez da matriz extracelular e à sinalização por GPCR.

YAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Yap1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

YAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Yap1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Yap1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de YAP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Yap1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de YAP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via YAP em células tumorais com expressão de Yap1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.