XPC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401499-ACT

ヒトXPCは、紫外線誘発性光産物や嵩高い化学付加体などの二重らせんを歪める損傷を検知することで、ゲノム全体ヌクレオチド除去修復（GG-NER）を開始するDNA損傷認識因子をコードしている。XPCはRAD23BおよびCETN2と協調して損傷の確認と下流NER因子のリクルートを促進し、ゲノム安定性、複製フォークの完全性、ならびに細胞周期チェックポイントシグナル伝達を支える。XPC依存的修復が破綻すると突然変異負荷が増大し、遺伝毒性ストレスに対する細胞応答が変化するため、XPC機能不全はがん感受性や光過敏性の表現型と関連づけられている。DNA修復ネットワークの中核ノードとして、XPCの発現は変異誘発、環境発がん、修復経路間クロストークの研究でしばしば解析対象となる。

XPC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性XPCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

XPC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における XPC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はXPC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性XPCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のXPC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるXPC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびXPC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるXPC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。