XAF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402427-ACT

XAF1 (fator 1 associado à XIAP) é um supressor tumoral pró-apoptótico que antagoniza proteínas inibidoras de apoptose, incluindo a XIAP, para facilitar a ativação de caspases e a apoptose mitocondrial. Sua expressão é frequentemente induzida por sinalização de interferon e por estresse celular, ligando a XAF1 a respostas imunes inatas e a programas transcricionais que limitam a sobrevivência em condições de dano. A redução da expressão de XAF1 por hipermetilação do promotor ou repressão transcricional tem sido relatada em múltiplas neoplasias e, com frequência, está associada à resistência à apoptose e a uma sensibilidade alterada a vias de estresse. Como regulador de decisões de destino celular, XAF1 é amplamente estudado em contextos de controle do ciclo celular, respostas a danos no DNA e interações (cross-talk) com a sinalização inflamatória.

XAF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de XAF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

XAF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus XAF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição XAF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de XAF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus XAF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de XAF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via XAF1 em células tumorais com expressão de XAF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.